При росте: Идеальные пропорции тела — Отдел социального служения и благотворительности при Астраханско-Камызякской епархии

Содержание

Узнай свой идеальный вес!

А какой ваш идеальный вес? Фото: Getty images

Долгое время народ пользовался простенькой формулой Брока. Вес равен росту в сантиметрах минус 100. Пример: рост 178 см – 100 = 78 кг. И для мужчин и для женщин.

Потом ввели поправки. Если ваш рост меньше 155 см, надо вычитать 95. От 155 до 165 см – 100. Рост 165-175 см – вычитаем 105. Выше 175 см — вычитаем 110. По модернизированной формуле Брока при росте 178 см нормальный вес получается уже 68 кг. Н-да, большая разница с первоначальной формулой. Путаница…

Потом в моду вошел индекс массы тела – ИМТ. Или индекс Кетле.

Надо разделить свой вес в килограммах на рост в метрах, возведенный в квадрат.

Норма – индекс от 19.5 до 24.9.

Излишняя худоба — ниже 19.5.

Избыточный вес: 25-27.9.

Ожирение 1 степени: 28-30.9.

Ожирение 2 степени:31-35.9.

Ожирение 3 степени: 36-40.9.

Ожирение 4 степени – индекс более 41.

Пример: рост 178 см, вес – 83 кг.

Сначала вычислим, чему равен рост в квадрате в метрах. 1.78 х 1.78=3.17.

83:3.17=26. Вес избыточный. Каков же нормальный вес для человека ростом 178 см?

Нижняя граница: рост в квадрате 3.17 умножаем на индекс 19.5=62 кг. Верхняя:3.17х24.9=79 кг.

Вычисления, как видим, сложные. Но и модный индекс массы тела ИМТ, увы, не учитывает ваш пол, телосложение. Некоторые тучные люди оправдываются, мол, зачем мне сбрасывать вес, у меня же широкая кость!

Универсальную таблицу идеального веса разработали специалисты американской страховой компании Metropolitan Life Insurance Company (Metlife). Она учитывает не только рост, но и телосложение мужчин, женщин от 25 лет и старше. Именно эту таблицу рекомендует в своем мировом бестселлере «Transcend : девять шагов на пути к вечной жизни» знаменитый футуролог, изобретатель Рей Курцвейл. Рей — технический директор компании Googlе, занимается там практическими вопросами будущего человеческого бессмертия.

Измерьте обхват своего запястья мягкой сантиметровой лентой.

Недавно его бестселлер выпустило на русском языке издательство «Манн, Иванов и Фербер».

Для начала определите тип своего телосложения. Для этого измерьте обхват своего запястья мягкой сантиметровой лентой. Или куском веревки, который потом легко будет измерить линейкой.

Путин раскритиковал субсидирование экспорта зерна при росте мировых цен :: Экономика :: РБК

Президент России Владимир Путин не считает целесообразным субсидирование экспорта зерна при росте мировых цен на него. Об этом он заявил на встрече с главредами СМИ, фрагменты которой показал телеканал «Россия 24».

«Если мы на мировом рынке занимаем определенную нишу и там растут цены на то же зерно, мы знаем, что у нас внутри страны, как потребляют хлебобулочные изделия. При этом мы продолжаем субсидировать экспорт. <…> Ну хорошо, цены выросли, но субсидировать зачем, увеличивая экспорт?» — сказал президент.

Росстат оценил урожай зерна в 2020 году как второй в истории

Путин отметил, что «то же самое происходит с нефтью». По его словам, представители этой отрасли говорят, что в условиях роста цен на мировом рынке они должны продавать нефть по новым ценам внутри страны, чтобы не понести убытки.

«Какие убытки? Недополученная сверхприбыль — да, но убытки-то здесь при чем? То же самое и по зерну», — объяснил президент.

Тульская область может увеличить коечный фонд для ковид-пациентов при росте заболеваемости — Центр |

19 мая. Interfax-Russia.ru — В медицинских учреждениях Тульской области могут дополнительно развернуть 600 коек в случае роста заболеваемости COVID-19, сообщил заместитель председателя правительства региона Дмитрий Марков на заседании областного оперштаба по коронавирусу.

В настоящее время на лечении в ковид-госпиталях находятся 427 человек, каждый второй — в тяжелом состоянии. В основном это люди старше 65 лет. На сегодня свободно 141 место, это 25% от общего количества.

«При увеличении больных COVID-19 коечный фонд может быть увеличен на 600 коек. В регионе создан резерв средств индивидуальной защиты и препаратов для лечения коронавируса», — приводит пресс-служба облправительства слова Маркова.

Вакцинация от COVID-19 проводится в 51 пункте на базе учреждений здравоохранения, работают 44 выездные прививочные бригады, 10 мобильных комплексов. Первым компонентом привиты 161 тыс. 316 человек, обоими компонентами — 131 тыс. 636 человек. Муниципалитеты-лидеры по числу вакцинированных жителей — Каменский, Куркинский, Кимовский районы и Тула.

При этом на ряде тульских предприятий вакцинация среди работников не проводится.

«На некоторых из этих предприятий вакцинированные сотрудники есть, но кадровая служба об этом не знает, что свидетельствует о невнимании к трудовому коллективу со стороны руководства», — сказал Марков.

Губернатор назвал такое пренебрежительное отношение к своим сотрудникам недопустимым.

Глава региона отметил, что ситуация с заболеваемостью начинает меняться, и основная задача сейчас — усилить профилактику, сделав акцент на вакцинации.

«Мы видим, что в некоторых городах региона опять фиксируется рост заболеваемости. Каждый должен заботиться о себе, о своей жизни. Единственный способ остановить эту беду — сделать прививку! Для меня как губернатора самое важное — это жизнь и здоровье жителей региона. И мне не хотелось бы снова вводить ограничения, которые действовали прошлой весной. Поэтому я от всего сердца прошу тех, кто еще не прошел вакцинацию, сделать это», — подчеркнул Дюмин.

В Тульской области выявлено 39 тыс. 432 заразившихся коронавирусом. Выздоровели 36 тыс. 982 человека, 1 тыс. 965 человек скончались.

Антон Глушков: Принятие законопроекта о возможности изменения цены госконтракта при росте цен на стройматериалы позволит снизить число незавершенных проектов

Рост цен на строительные ресурсы и возможные пути решения проблем в сфере ценообразования стали ключевой темой выездного заседания Комиссии по вопросам ценообразования в строительстве и технологическому и ценовому аудиту Общественного совета при Минстрое России, которое состоялось в среду, 14 апреля, в Красноярске. Модератором мероприятия выступил председатель Комиссии, президент Национального объединения строителей (НОСТРОЙ) Антон Глушков.

Заседание Комиссии объединило представителей федеральных органов исполнительной власти и ведущих экспертов строительной отрасли. В режиме онлайн со вступительным словом к участникам обратился первый заместитель министра строительства и ЖКХ РФ Александр Ломакин, обозначив ряд факторов, влияющих на рост цен на строительные материалы. Он отметил, что ведомством совместно с ключевыми игроками строительной отрасли ведется активная работа по выработке механизмов, направленных на сдерживание экономически необоснованного роста цен на рынке стройматериалов.

Ответственный секретарь Общественного совета при Минстрое России, помощник министра Светлана Кузьменко по видеоконференцсвязи сообщила, что членами Комиссии по вопросам ценообразования в строительстве и технологическому и ценовому аудиту подготовлены предложения по выработке единых параметров мониторинга цен на строительные ресурсы. Минстроем совместно с Минтрансом, Главгосэкспертизой и НОСТРОЙ сформирована единая методология мониторинга цен на строительные ресурсы, который ведется еженедельно.

Директор департамента ценообразования и градостроительного зонирования Минстроя России Ирина Тютьмина в своем онлайн-выступлении уточнила, что мониторинг цен на стройматериалы также проводится и для расчета индексов изменений сметной стоимости.

Заместитель начальника ФАУ «Главгосэкспертиза России» по ценообразованию Сергей Лахаев рассказал о результатах проведенного мониторинга. Он подтвердил, что к концу 2020 года произошел скачок стоимости металлоизделий строительного сортамента (сталь арматурная, сталь листовая, металлоконструкции). Суммарный рост по году на всей территории Российской Федерации составил в среднем 50-80% в зависимости от сортамента.

Затем, благодаря предпринятым мерам, завышенная стоимость на металлопродукцию пошла на спад.

Для новых контрактов Минстрой России и ФАУ «Главгосэкспертиза России» совместно с регионами провели работу по разработке индексов изменения сметной стоимости строительства на I квартал 2021 год с учетом сложившегося повышения стоимости на строительные материалы. В настоящее время все регионы получили эти индексы, из них 19 регионов – индексы по статьям затрат. Средний прирост индексов к III кварталу 2020 года составил 7,12% по Центральному федеральному округу, 7,50% – по Приволжскому федеральному округу, 6,58% – по Южному федеральному округу. Таким образом, для новых объектов строительства удалось частично учесть рост стоимости на металлопродукцию.

Однако по-прежнему негативным остается тот факт, что после стабилизации и небольшого падения в начале года металлопрокат возобновил свой рост. За ним последовали в росте стоимости не только металлозависимые строительные материалы.

Президент НОСТРОЙ Антон Глушков отметил, что рынку нужен механизм, который будет регулировать подобные всплески и поможет не допустить остановки строек и срыва национальных проектов.

«Решение этого вопроса в числе приоритетных задач сегодня стоит на повестке у всех заинтересованных структур отрасли, включая и органы исполнительной власти, и бизнес, – отметил Антон Глушков. – Мы благодарны Минстрою России, что ведомством поддержаны предложения нацобъединения по разработке мер в части изменения твердой цены контракта и подготовлен законопроект с поправками в 44-ФЗ о возможности изменения цены контракта в связи с изменением стоимости строительных ресурсов».

Антон Глушков добавил, что НОСТРОЙ предлагает распространить действие закона на отношения, возникшие до его вступления в силу, а также выработать решения по сроку действия договоров – сейчас в проекте он составляет не менее одного года, но у 75% контрактов, находящихся на исполнении, срок действия составляет менее 12 месяцев.

В продолжение темы роста цен на стройматериалы, начальник инспекции Счетной палаты по контролю за ходом развития приоритетных геостратегических территорий РФ Павел Лучников отметил, что изначально некачественно составленная проектная документация наряду с неправильным выполнением работ – самый распространенный недостаток, с которым сталкиваются надзорные органы в ходе проверок.

«Уже в ходе строительства выясняется, что на основании неправильных документов и по тем ценам, которые в них указаны, объекты построить невозможно. Возникает необходимость в проведении повторной экспертизы, что влечет за собой дополнительные расходы. Кроме того, до 90% закупок при внешнем соответствии 44-ФЗ размещаются у аффилированных организаций, в связи с чем добиться, чтобы закупка прошла по минимальной стоимости, и чтобы качественно были выполнены работы, невозможно», – пояснил Павел Лучников.

Подобные проблемы влекут за собой возникновение объектов незавершенного строительства. В целях решения этого вопроса Счетной палатой РФ совместно с Правительством России разрабатывается дорожная карта по сокращению числа объектов незавершенного строительства. В ней также найдут отражение мероприятия в части ценообразования, поскольку проблема в этой сфере зачастую вместе с недостаточным финансированием и становится причиной появления недостроев. В настоящий момент дорожная карта проходит согласование в Минэкономразвития и Минстрое.

Также с докладом о реализации мероприятий по развитию строительного ценообразования выступила председатель подкомитета по ценообразованию НОСТРОЙ Ольга Дидковская.

Руководитель Ассоциации СРО «ГЛАВКУЗБАССТРОЙ» (Кемеровская область) Ирина Кузеванова и генеральный директор ООО «КапиталСтрой» (Москва) Юрий Кашуба поделились прикладным опытом своих организаций и нюансами ценообразования, в частности влиянием роста цен на себестоимость строительства. О ситуации в Республике Крым рассказал президент СРО «СТРОИТЕЛИ КРЫМА» Антон Кузенский.

С докладом по вопросу о смете контракта как механизме приближения сметной стоимости строительства к рыночной выступил заместитель директора департамента ценообразования и градостроительного зонирования Минстроя России Сергей Головин.

Подвел итоги круглого стола по просьбе Антона Глушкова председатель Комитета по развитию строительной отрасли и контрактной системы НОСТРОЙ, вице-президент Российского союза строителей Эдуард Дадов.

В заключение заседания президент НОСТРОЙ Антон Глушков предложил провести с участием Минстроя и Счетной палаты России серию разъяснительных семинаров для региональных заказчиков и контролирующих органов по применению приказа Минстроя России от 23 декабря 2019 г № 841/пр.

Запись расширенного заседания Комиссии по вопросам ценообразования в строительстве и технологического и ценового аудита Общественного совета при Минстрое России можно посмотреть на Youtube-канале НОСТРОЙ.

Презентации выступающих:

Путин не видит смысла в субсидировании экспорта зерна при росте мировых цен на него — Экономика и бизнес

МОСКВА, 14 февраля. /ТАСС/. Президент России Владимир Путин заявил, что не считает целесообразной меру по субсидированию экспорта зерна при росте мировых цен на него. На встрече с главредами СМИ, фрагменты которой показал в воскресенье телеканал «Россия-24», он отметил, что Россия на мировом рынке занимает определенную нишу и там растут цены на зерно.

«Мы знаем, как у нас внутри страны потребляются хлебобулочные изделия, при этом мы продолжаем субсидировать экспорт. Цены выросли, но субсидировать-то зачем, увеличивая экспорт?» — с удивлением спросил Путин.

Президент указал, что «то же самое происходит с нефтью». «Цены на мировом рынке выросли, и нефтяники мне говорят: мы должны внутри продавать по таким же ценам, потому что у нас убытки. Какие убытки? Недополученная сверхприбыль — да, но убытки-то здесь причем? То же самое и по зерну», — пояснил он.

В целом говоря о сельскохозяйственной сфере, он подчеркнул, что власти РФ гордятся аграриями, которые «добились выдающихся результатов, прежде всего, благодаря труду людей, которые работают на полях, фермах и заводах, благодаря мужеству организаторов производств, бизнесу, который вкладывает, их таланту, умению организовать работу».

«Но давайте не будем забывать, что все это было сделано благодаря поддержке со стороны государства: это льготы, это кредиты, это поддержка в случае неблагоприятных погодных условий, это субсидирование экспорта и большой набор [мер] по удобрениям, транспорту, по ГСМ и так далее. Все это было сделано в том числе и при прямой поддержке государства, тогда, когда нас и вашего покорного слугу костерили почем зря, говорили, что все это в черную дыру, все напрасно, никогда у нас ничего не будет», — добавил Путин.

Он отметил также, что, наряду с вакциной от коронавируса, сфера АПК является тем направлением, где Россия осуществила очевидный прорыв.

Внедрение DIRECTUM – логичный шаг при росте компании

Компания Акелон объявила о старте проекта внедрения ЕСМ-системы DIRECTUM в крупной фармацевтической компании «Р-Фарм». Итогом проекта станет повышение качества коммуникаций между подразделениями и скорости документооборота.

ЗАО «Р-Фарм» – российская высокотехнологичная фармацевтическая компания. Основными направлениями деятельности являются: производство готовых лекарственных форм, активных фармацевтических ингредиентов химической природы и биотехнологических субстанций, исследования и разработка инновационных препаратов и технологий, вывод на российский рынок современных высокоэффективных лекарственных средств, а также обучение и подготовка специалистов для фарминдустрии и здравоохранения. Сегодня в компании трудятся более 2800 высококвалифицированных специалистов, на территории России действует более 40 филиалов и представительств.

Активное развитие новых направлений деятельности компании и расширение филиальной сети потребовало оптимизации взаимодействия между сотрудниками, усиления контроля качества и сроков выполняемых работ. С целью реализации данной задачи руководство ЗАО «Р-Фарм» приняло решение о начале проекта по автоматизации документооборота на базе ECM-системы DIRECTUM. Поставщиком системы и услуг стал генеральный партнер DIRECTUM – компания Акелон.

В рамках проекта запланировано формирование в компании «Р-Фарм» единого стандарта документооборота и организации внутреннего взаимодействия между подразделениями. Для реализации поставленных целей будет использован функционал Базовых модулей DIRECTUM, а также бизнес-решений «Классическое делопроизводство», «Управление договорами», «Управление доверенностями» и «Финансовый архив». Внедрение системы DIRECTUM позволит компании «Р-Фарм» структурировать бизнес-процессы, повысить скорость документооборота, сократить время на поиск, обработку и доставку документов, повысить уровень исполнительской дисциплины.

Проект рассчитан на 6 календарных месяцев и предусматривает автоматизацию и настройку бизнес-процессов, интеграцию с внутренними системами компании «Р-Фарм», обучение персонала. В дальнейшем компания «Р-Фарм» планирует развивать систему в соответствии с корпоративной стратегией компании.

Новость партнера

Путин не поддержал идею субсидирования экспорта зерна при росте мировых цен

Растениеводство 15 февраля 2021

МОСКВА, 14 февраля. /ТАСС/. Президент России Владимир Путин заявил, что не считает целесообразной меру по субсидированию экспорта зерна при росте мировых цен на него. На встрече с главредами СМИ, фрагменты которой показал в воскресенье телеканал

«Россия-24», он отметил, что Россия на мировом рынке занимает определенную нишу и там растут цены на зерно.

Источник

акций с лучшими темпами роста для покупки в первом квартале 2021 года

Обновлено: 14 мая 2021 г., 14:15

Инвестирование в акции роста может стать отличным способом заработать на фондовом рынке состояние, которое меняет жизнь. Ключ, конечно же, заключается в том, чтобы знать, какие акции роста покупать и когда.

Чтобы помочь вам начать работу, вот удобное руководство по инвестициям в рост. С помощью этих инструментов и стратегий вы сможете позиционировать свой портфель для долгосрочного успеха за счет акций роста.

Что такое акции роста?

Растущие акции — это компании, которые увеличивают свою выручку и прибыль более быстрыми темпами, чем средний бизнес в своей отрасли или на рынке в целом. Однако инвестирование в рост — это больше, чем просто подбор акций, которые растут.

Часто растущая компания разрабатывает инновационный продукт или услугу, которые завоевывают долю на существующих рынках, выходят на новые рынки или даже создают совершенно новые отрасли.

Компании, которые могут расти быстрее среднего в течение длительного периода, как правило, получают вознаграждение от рынка, принося при этом солидную прибыль акционерам.И чем быстрее они растут, тем больше может быть прибыль.

В отличие от стоимостных акций, быстрорастущие акции обычно дороже, чем средние акции, с точки зрения таких показателей, как отношение цены к прибыли, цены к продажам и отношения цены к свободному денежному потоку.

Тем не менее, несмотря на высокую цену, акции лучших компаний роста могут приносить инвесторам огромную прибыль, поскольку они реализуют свой огромный потенциал роста.

Вы знали…

Растущие акции — это компании, которые увеличивают свою выручку и прибыль быстрее, чем средний бизнес в своей отрасли или на рынке в целом.

Акции быстрого роста

Чтобы предоставить вам несколько примеров, вот 10 акций превосходного роста, доступных сегодня на фондовом рынке:

CAGR = среднегодовой темп роста. Источники данных: Morningstar, квартальные финансовые отчеты компании

Как видно из этого списка, акции роста бывают самых разных форм и размеров. Их можно найти в самых разных отраслях, как в США, так и на международных рынках.Фактически, хотя все акции в этом списке относятся к более крупным компаниям, более мелкие компании также могут стать благодатной почвой для инвесторов в рост.

Отличный способ инвестировать в широкий спектр акций роста малой капитализации — через биржевой фонд (ETF), такой как Vanguard Small-Cap Growth ETF (NYSEMKT: VBK). Этот фонд отслеживает показатели CRSP US Small Cap Growth Index, который дает инвесторам простой способ одновременно инвестировать примерно в 580 компаний с малой капитализацией.

Важно отметить, что ETF Vanguard Small-Cap Growth ETF имеет сверхнизкий коэффициент расходов, равный 0.07%. Это означает, что инвесторы будут получать почти всю прибыль фонда, а Vanguard получит лишь небольшую часть комиссионных. (Годовой коэффициент расходов 0,07% соответствует только 0,70 доллара США в виде комиссионных на 1 000 долларов США, инвестированных в год.)

Источник изображения: Getty Images

Как найти акции роста

Чтобы найти акции сильного роста, вам необходимо:

Определить сильные долгосрочные рыночные тенденции и компании, которые лучше всего могут извлечь из них прибыль
Сузить свой список до предприятий с сильными конкурентными преимуществами
Сузьте список до компаний с крупными доступными рынками

Определите тенденции и компании, которые ими движут.

Компании, которые могут извлечь выгоду из сильных долгосрочных тенденций, могут увеличить свои продажи и прибыль на многие годы, создавая богатство для своих акционеров.

Пандемия коронавируса ускорила многие тенденции, которые уже развивались. Вот несколько примеров, а также компаний, которые могут помочь вам получить прибыль от этих тенденций:

Электронная коммерция: Поскольку все больше людей совершают покупки в Интернете, Amazon и Shopify имеют хорошие возможности для получения прибыли в США (и на многих международных рынках). . Между тем, Alibaba (NYSE: BABA) и JD.com (NASDAQ: JD) доминируют в электронной коммерции в Китае. А MercadoLibre (NASDAQ: MELI) занимает лидирующую долю на рынке онлайн-торговли в Латинской Америке.
Цифровая реклама: Facebook (NASDAQ: FB) и Alphabet (NASDAQ: GOOG) (NASDAQ: GOOGL) владеют львиной долей рынка цифровой рекламы и готовы получить значительную прибыль, поскольку маркетинговые бюджеты уходят с телевидения и распечатать на онлайн-каналах.
Цифровые платежи: Square (NYSE: SQ) помогает ускорить глобальный переход от наличных денег к цифровым формам оплаты, позволяя компаниям любого размера принимать транзакции по дебетовым и кредитным картам.
Облачные вычисления: Вычислительная мощность переносится с локальных центров обработки данных на облачные серверы. Сервисы облачной инфраструктуры Amazon (NASDAQ: AMZN) и Alibaba помогают сделать это возможным, а Salesforce.com (NYSE: CRM) предоставляет одни из лучших доступных облачных программ.
Перерезание шнура и потоковые развлечения: Миллионы людей отменяют подписку на кабельное телевидение и заменяют их менее дорогими и более удобными потоковыми функциями. Netflix (NASDAQ: NFLX), мировой лидер в области потоковых развлечений, предлагает отличный способ получить прибыль от этой тенденции.
Удаленная работа: Для многих организаций организация удаленной работы стала необходимостью во время пандемии COVID-19. Исследования показывают, что тенденция к удаленной работе сохранится и после завершения пандемии, поскольку компании осознают финансовую эффективность и преимущества для персонала, связанные с гибкими рабочими условиями. Zoom (NASDAQ: ZM) продолжит извлекать выгоду из этой тенденции благодаря своим удобным облачным инструментам для совместной работы по телефону и видео.

Главное — попытаться инвестировать в такие тренды и компании как можно раньше. Чем раньше вы войдете, тем больше вы получите прибыли. Однако самые сильные тенденции могут длиться многие годы и даже десятилетия, что дает вам достаточно времени, чтобы заявить о своей доле прибыли, которую они создают.

Сделайте ставку на компании с конкурентными преимуществами

Также важно инвестировать в растущие компании, обладающие сильными конкурентными преимуществами. В противном случае их конкуренты могут обойти их, и их рост может длиться недолго.

Некоторые конкурентные преимущества:

Сетевые эффекты: Facebook — яркий тому пример. Каждый человек, который присоединяется к его платформе в социальных сетях, делает ее более ценной для других участников. Сетевые эффекты могут затруднить новым участникам процесс вытеснения нынешнего лидера по доле рынка, и более 2,5 миллиардов пользователей Facebook, безусловно, делают маловероятным, что новая компания, занимающаяся социальными сетями, заменит его.
Преимущества шкалы: Размер может быть еще одним важным преимуществом.Amazon является отличным примером здесь, поскольку его огромная глобальная сеть выполнения заказов — это то, что его более мелким конкурентам будет чрезвычайно трудно воспроизвести.
Высокие затраты на переход: Затраты на переход — это расходы и трудности, связанные с переходом на конкурирующий продукт или услугу. Shopify, которая служит операционной системой онлайн-торговли для более чем 1 миллиона предприятий, является отличным примером бизнеса с высокими затратами на переключение. Как только компания начнет использовать Shopify в качестве ядра своей онлайн-деятельности, вряд ли она перенесет трудности, связанные с переключением на другого конкурента.

Определите компании с крупными доступными рынками

И наконец, вы захотите инвестировать в компании с крупными доступными рынками — и еще впереди ждут длинные взлетно-посадочные полосы. Отраслевые отчеты исследовательских фирм, таких как Gartner (NYSE: IT) и eMarketer, которые предоставляют оценки размеров отрасли, прогнозы роста и данные о рыночной доле, могут быть очень полезными в этом отношении.

Чем больше возможности, тем крупнее может стать бизнес.И чем раньше в его цикле роста, тем дольше он может продолжать расти впечатляющими темпами.

Что такое акции роста?

Акция роста — это акция компании, которая, как ожидается, увеличит свою прибыль или выручку быстрее, чем средний бизнес в своей отрасли или на рынке в целом. Растущие акции нравятся многим инвесторам, потому что Уолл-Стрит часто оценивает компанию, основываясь на множителе ее прибыли (прибыли), которая может уменьшиться, если компания реинвестирует большую часть оставшихся денежных средств в дальнейшее расширение.

Что такое акции роста и стоимости?

Стоимостное инвестирование и инвестирование в рост — это два разных стиля инвестирования. Обычно стоимостные акции предоставляют возможность покупать акции по цене ниже их фактической стоимости, а акции роста демонстрируют выручку и потенциал роста прибыли выше среднего. Уолл-стрит любит аккуратно классифицировать акции как акции роста или стоимости. На самом деле все немного сложнее, поскольку некоторые акции имеют элементы как стоимости, так и роста.Тем не менее, существуют важные различия между растущими и стоимостными акциями, и многие инвесторы предпочитают один стиль инвестирования другому.

Какие акции роста лучше всего?

Вот 10 превосходных акций роста, доступных сегодня на фондовом рынке:

Shopify
Alibaba
Square
MercadoLibre
Facebook
JD.com
Netflix
Amazon
Salesforce.com
Алфавит

Последние статьи

Имеют ли смысл розничные амбиции Netflix?

Этот удивительный шаг сначала вызовет сравнения с Disney и Amazon, но настоящее вдохновение компании, вероятно, исходит из Китая.

Лев Солнце | 16 июня 2021 г.

Аппаратный бизнес Facebook проникает на задний двор Apple

Но Apple не должна терять сон из-за планов Facebook по поводу умных часов.

Лев Солнце | 16 июня 2021 г.

Кэти Вуд идет на поиски выгодных покупок: 3 акции, которые она только что купила

Известный сборщик акций ARK Invest скупает многообещающие акции, которые торгуются значительно ниже недавних максимумов.

Рик Мунарриз | 16 июня 2021 г.

Когда Amazon заменит Walmart королем доходов?

Валовые продажи Amazon по-прежнему ниже, чем у Walmart, но они растут намного быстрее.

Дженнифер Сайбил | 16 июня 2021 г.

Следующая битва в Streaming Wars: Churn

Подписчики переключаются с одной потоковой службы на другую.

Адам Леви | 16 июня 2021 г.

3 главных акции, которые могут удвоить ваши деньги

Хорошие фьючерсы этих компаний еще не до конца оценены инвесторами.

Джон Баллард | 16 июня 2021 г.

Может ли Netflix стать Disney до того, как Disney станет Netflix?

Его более крупный толчок к мерчандайзингу может стать ключевым шагом на этом пути.

Адам Леви | 16 июня 2021 г.

2 риска, которые следует знать инвесторам перед покупкой акций Alibaba

Alibaba сталкивается с огромной конкуренцией в сфере электронной коммерции.

Лоуренс Нга | 16 июня 2021 г.

2 причины, по которым Netflix выиграет свой мерчандайзинговый гамбит

Ведущий сервис потокового видео премиум-класса имеет интернет-магазин. Это больше, чем вы думаете.

Рик Мунарриз | 15 июня 2021 г.

3 Дешевые международные акции для диверсификации портфеля

Эти три китайские компании выводят рынок электросамокатов, электронной коммерции и цифрового контента на новый уровень.

Хосе Наджарро | 15 июня 2021 г.

По мере роста Китай начинает ослаблять стимулы

Послушайте эту историю

Ваш браузер не поддерживает элемент

Больше аудио и подкастов на iOS или Android.

Эта статья была обновлена 

ФРАЗА «первым пришел — первым обслужен» стала сокращением опыта Китая в отношении пандемии COVID-19: это и место, где вирус начал распространяться, и первая крупная страна, которая его контролирует.Его ранняя неудача и последующий успех будут изучаться эпидемиологами еще долгие годы. Но для экономистов и инвесторов в настоящий момент большее значение имеет еще один принцип «первым пришел — первым ушел». Китай был первой страной, которая открыла краны для кредитования и расходования средств перед лицом спада, связанного с коронавирусом. Теперь он первым начинает их закрывать, давая другим частичное представление о том, как будет выглядеть конец стимула.

Параллели между странами, конечно, несовершенные. Китаю, например, потребовалось меньше стимулов для начала, потому что его рабочие вернулись на фабрики и в офисы почти год назад.Но можно сделать несколько общих выводов о его возвращении к более нормальной денежно-кредитной и фискальной политике. На Всекитайском собрании народных представителей, ежегодном официальном парламенте, который начался 5 марта, лидеры Китая изложили свою основную дорожную карту.

Наиболее заметным аспектом является его постепенность. На открытии конгресса премьер-министр Китая Ли Кэцян объявил, что в этом году Китай намерен достичь бюджетного дефицита в размере 3,2% ВВП по сравнению с 3,6% в прошлом году. По данным банка Morgan Stanley, с учетом других квазифискальных мер, таких как расходы компаний, связанных с государством, истинный бюджетный дефицит Китая составит около 12% ВВП по сравнению с рекордными 15% в прошлом году.Это сокращение, но оно все же превышает его дефицит в 2019 году, составляющий примерно 10% ВВП.

Центральный банк также проявил осторожность. Он отозвал ликвидность, чтобы поддержать рыночные процентные ставки и замедлить рост банковского кредитования. Но и цена, и количество кредитов остаются более высокими, чем до пандемии. «Они стремятся избежать резкого поворота в политической ориентации», — говорит Чжу Нин из Шанхайского передового института финансов. С 2021 года, когда начнется новый пятилетний план для Китая, официальные лица будут спешить запускать инфраструктурные проекты.Новый план — важная часть политического процесса в Китае — обещает большое расширение железных дорог, линий электропередач и многое другое. Это, по словам г-на Чжу, должно помочь нейтрализовать прекращение стимулов, связанных с коронавирусом.

Затягивание, пусть и постепенное, обязательно будет неровным. В последние пару недель мировые рынки были потрясены ростом доходности казначейских облигаций Америки. Китай пережил аналогичное давление в конце января, когда центральный банк был гораздо скупее в своих операциях на открытом рынке, чем ожидалось, что привело к резкому скачку ставок по однодневным займам.Акции резко упали, но восстановились, когда центральный банк ослабил свои позиции. Должностные лица, возможно, хотели привлечь внимание инвесторов. Они также предупредили нас о ценах на активы. 2 марта Гуо Шуцин, главный банковский регулятор, предупредил о пузырях на китайском рынке недвижимости и мировых финансовых рынках.

Так же, как Китай сделал для укрощения covid-19, нормализация его политики по-прежнему зависит от хода пандемии во всем мире. Внутренние поездки остаются ограниченными из-за сохраняющейся обеспокоенности по поводу вируса, а международные поездки в значительной степени заблокированы.Медленное внедрение вакцин в Китае означает, что нет никаких шансов, что он скоро распахнет свои двери для всего мира.

Тем не менее, учитывая, насколько тяжелым был прошлый год, восстановление Китая, вероятно, будет значительным — что-то еще, что понравится и другим странам. Многие аналитики считают, что в 2021 году рост может составить 9% по сравнению с 2,3% в прошлом году. Но правительство, по крайней мере публично, принижает свои взгляды. В своем обращении к конгрессу г-н Ли сказал, что Китай будет стремиться к росту выше 6% в этом году.

За исключением серьезных неудач, этого должно быть легко. Даже при нулевом квартальном росте до конца этого года Китай все равно достигнет роста на 6% в годовом исчислении к 2021 году в целом. Это благодаря совокупному эффекту его высоких показателей в конце 2020 года и очень низкой базы для сравнения в первом полугодии (например, ожидается, что рост в первом квартале 2021 года вырастет почти до 20%. по сравнению с годом ранее, когда страна какое-то время находилась в изоляции).Таким образом, цель роста на 6% является консервативной. Это оставляет Китаю много места для маневра, если пандемия окажется устойчивой, и много возможностей для дальнейшего снижения, если экономика нагреется. После всех невзгод прошлого года есть смысл проявить гибкость. ■

Эта статья появилась в разделе «Финансы и экономика» печатного издания под заголовком «Тест на снижение»

Качество жизни детей и подростков с дефицитом гормона роста: связь с лечением гормоном роста

Задний план: Качество жизни (QoL), связанное с дефицитом гормона роста (GHD), является предметом споров.

Методы: Мы проанализировали качество жизни 95 детей в возрасте 8-18 лет с изолированным GHD (72% мужчин), получавших гормон роста (GH). Этих детей сравнивали со 190 здоровыми детьми того же возраста и пола с аналогичным ростом [рост <10-го процентиля; контрольная группа 1 (CG1)] и 285 здоровых детей нормального роста, сопоставимых по возрасту и полу (контрольная группа 2: CG2). Качество жизни измерялось с помощью опросника KINDL®, относящегося к шести областям (физическое благополучие, эмоциональное благополучие, самооценка, семья, друзья и школа).

Полученные результаты: Качество жизни было значительно снижено в CG1 (размер эффекта 0,21) по сравнению с CG2, в то время как качество жизни у детей с GHD существенно не изменилось. При множественном линейном регрессионном анализе, скорректированном с учетом возраста, пола, ИМТ, миграционного фона и социально-экономического статуса, снижение SDS роста было связано с ухудшением качества жизни (особенно эмоционального благополучия), а лечение гормоном роста было значительно связано с улучшением самооценки.Увеличение SDS роста у детей, получавших GH, было положительно связано с QoL и всеми его подшкалами, кроме семьи и школы.

Выводы: Эти данные свидетельствуют о психологических последствиях низкого роста у детей и улучшении качества жизни у детей, получавших GH, с акцентом на самооценку и эмоциональное благополучие.

Повышенная смертность тяжелобольных взрослых, связанная с лечением гормоном роста

Задний план: Введение гормона роста может ослабить катаболический ответ на травму, операцию и сепсис.Однако влияние высоких доз гормона роста на продолжительность пребывания в отделении интенсивной терапии и в больнице, продолжительность искусственной вентиляции легких и исходы у тяжелобольных взрослых, госпитализированных на длительные периоды, неизвестно.

Методы: Мы провели два проспективных многоцентровых двойных слепых рандомизированных плацебо-контролируемых исследования параллельно с участием 247 финских пациентов и 285 пациентов из других европейских стран, которые находились в отделении интенсивной терапии в течение 5-7 дней и которым, как ожидается, потребуются интенсивная терапия не менее 10 дней.Пациенты перенесли кардиохирургические операции, операции на брюшной полости, множественные травмы или острую дыхательную недостаточность. Пациенты получали гормон роста (средняя [+/- SD] суточная доза, 0,10 +/- 0,02 мг на килограмм массы тела) или плацебо до выписки из отделения интенсивной терапии или в течение максимум 21 дня.

Полученные результаты: Уровень госпитальной смертности был выше у пациентов, получавших гормон роста, чем у тех, кто не получал (P <0.001 для обоих исследований). В финском исследовании уровень смертности составил 39 процентов в группе гормона роста по сравнению с 20 процентами в группе плацебо. Соответствующие показатели в международном исследовании составили 44 процента и 18 процентов. Относительный риск смерти для пациентов, получавших гормон роста, составлял 1,9 (доверительный интервал 95%, 1,3–2,9) в финском исследовании и 2,4 (интервал доверительного интервала 95%, 1,6–3,5) в международном исследовании. Среди выживших продолжительность пребывания в отделении интенсивной терапии и в больнице, а также продолжительность искусственной вентиляции легких были увеличены в группе гормона роста.

Выводы: У пациентов с длительным критическим заболеванием высокие дозы гормона роста связаны с повышенной заболеваемостью и смертностью.

Fox: предварительные продажи с ростом продаж в прайм-тайм, Digital

Fox увидела увеличение предварительных рекламных обязательств для своего графика прайм-тайма и расширение цифровых площадок в рамках ежегодного процесса предварительных продаж в отрасли, последнее из крупных медиакомпаний страны, которые увидели активную деятельность, поскольку рекламодатели пытаются двигаться вперед в условиях пандемии коронавируса. уменьшается.

Подразделение Fox Corporation продемонстрировало рост рекламных обязательств во всех сферах своего портфеля, включая вещательную сеть Fox; Fox Sports и Fox News Media, по словам человека, знакомого с этим вопросом. Компания также взяла на себя значительные обязательства в отношении Tubi, своего центра потокового видео, поддерживаемого рекламой, и сделала это заранее по сравнению с тем же периодом прошлого года.

Как и другие американские СМИ, Fox переживает восстановление интереса со стороны Мэдисон-авеню, которая сократила свои обязательства по телевизионной рекламе в 2020 году, поскольку пандемия коронавируса помешала бизнес-операциям и сорвала прямые спортивные трансляции и производство новых эпизодов сценариев драматических и других фильмов. комедии.

Сети пользуются законами спроса и предложения. Рейтинги линейного телевидения в целом снижаются, поскольку зрители все чаще переходят на потоковую передачу. Но всплеск спроса со стороны рекламодателей означает, что все больше спонсоров гонятся за спадом числа зрителей, что приводит к росту показателей рекламы. Компания Fox настаивала на увеличении на 19–22% скорости охвата 1000 зрителей, эта мера, известная как CPM, является неотъемлемой частью этих ежегодных переговоров между рекламодателями и Мэдисон-авеню. В прошлом году большинство сетей смогли обеспечить рост только от 3% до 4%.

Покупатели ожидают, что сети вырастут в общем объеме от 2% до 6% для линейного прайм-тайма, по оценкам Variety, Fox получила от 1,36 до 1,64 млрд долларов в 2020 году по сравнению с 1,6-1,82 млрд долларов в предыдущем году. Используя оценку покупателей в качестве ориентира, возможно, что Fox заработал от 1,39 до 1,74 миллиарда долларов.

дополнительный экранный ридер

Подробнее о:

словосочетаний роста с примерами | Macmillan Dictionary

увеличение важности, успеха или размера чего-либо; увеличение размера или развития живого существа

Прилагательные, часто используемые с ростом

быстро или сильно: взрывной, экспоненциальный, быстрый, массовый, быстрый, значительный, сильный, существенный, беспрецедентный Во второй половине двадцатого века наблюдался экспоненциальный рост авиаперелеты.стабильный: постоянный, стабильный, устойчивый Наша цель — обеспечить долгосрочный успех клуба за счет устойчивого роста числа членов и доходов от подписки. медленный: медленный, вялый Например, такие страны, как Япония и Швейцария, являются странами с низкими расходами, но имели медленный рост ВВП на душу населения в последние годы. нормальный или здоровый: здоровый, нормальный. Диапазон зерновых предлагает полностью сбалансированное питание для здорового роста. определенного типа: экономический, промышленный. другие страны.

Глаголы, часто используемые с ростом медленно: подавлять, предотвращать, ограничивать, замедлять, трюк, подавлять Правительство в течение нескольких лет пыталось сдержать рост трафика. умственный и физический рост детей задерживался недоеданием. увидеть или показать рост: увидеть, показать, стать свидетелем в неравенстве доходов за последние 20 лет.

Глаголы, которые часто следуют за ростом

ускоряться, падать, происходить, опережать, замедлять Рост костей наиболее быстро происходит во время жизни плода, младенчества и полового созревания. Рост потребления намного опережает рост населения.

Существительные, часто используемые после роста

потенциал, перспектива, ставка, рывок, стратегия Более крупные компании все чаще осознают потенциал роста экологических рынков. Всплески роста могут вызвать определенные подростковые раковые образования.

Существительные + в часто употребляемых до роста

спад, рост, замедление Текущее замедление экономического роста оказало значительное влияние на уверенность бизнеса.

Культуральная среда для органоидов, созданная с факторами роста с определенной клеточной активностью

Экспрессионные плазмиды

Конструкция pR-spondin 1 для продукции R-спондина 1 основана на ранее описанном векторе на основе pETDuet ¹⁰ для двойной экспрессии a Слитый белок, содержащий R-спондин 1 (мальтозосвязывающий белок, тетрацистеиновая метка, сайт расщепления тромбина, остатки 21–145 человеческого R-спондина 1 (Uniprot: O60565) и гексагистидиновая метка) и E .coli изомераза с дисульфидной связью, DsbC . Мы вставили кодирующую последовательность Avi-tag перед трансгеном R-спондина 1 путем переваривания исходной конструкции с помощью BamH I и Not I и сборки Гибсона для создания pR-спондина 1 (фиг. 2A).

Плазмидами для тестирования активности R-спондина 1 в усилении активности пути Wnt являются Super 8x TOPFlash (SuperTop; Addgene 12456) и контрольный репортерный вектор люциферазы Renilla pRL-SV40P (Promega).

Экспрессионная конструкция pHAT4-NΔ-Grem1, кодирующая гексагистидиновую метку, сайт расщепления протеазой TEV и аминокислоты 72–184 человеческого гремлина 1 (Uniprot: O60565), была описана ранее ⁴ (фиг. 3A). ). Экспрессия человеческого BMP2 из бактериальной плазмиды pBAT-BMP2 и ее очистка подробно описаны в другом месте ⁴.

Клеточные линии

Клетки

HEK293T и C2C12 были получены из АТСС. Клеточные линии обычно проверяются на контаминацию микоплазмой и проверяются с помощью профилирования ДНК с короткими тандемными повторами (STR) и ДНК-фингерпринта, как описано в документе стандартов ATCC SDO Workgroup ASN-0002 ¹¹.

Компоненты сред для органоидов

Компоненты соответствующих составов сред для каждого типа органоидов, использованных в исследовании, перечисленных в таблице 2, следующие: Базовая среда — Advanced DMEM F12 (Gibco), содержащая 1X пенициллин / стрептомицин и 10 мМ буфер HEPES pH 7,0. Добавки включают следующее: добавки B27 и N2 (Gibco), N-ацетил-L-цистеин (NAC; Sigma-Aldrich), гастрин 1 человека (Sigma-Aldrich), A83-01 (Sigma-Aldrich), SB202190 (Sigma- Aldrich), простагландин E2 (PGE2; Sigma-Aldrich), гастрин I (Sigma-Aldrich), никотинамид (Sigma-Aldrich) и примоцин (InvivoGen).В исследовании использовались коммерческие факторы роста: R-спондин 1 (аминокислоты 31–263; кат. 4645-RS-025), Gremlin 1 (кат. 5190-GR-050), FGF-2 (кат. 233). -FB-010), Neuregulin-1 / NRG-1 (кат. 396-HB / CF) и EGF (кат. 236-EG-200), все от R&D Systems. Все органоиды выращивали в матригеле с пониженным содержанием фактора роста, не содержащем сыворотки (Fisher Scientific).

Экспрессия и очистка R-спондина 1

Экспрессию слитого белка R-спондина 1 из pR-спондина 1 проводили в хозяине E.coli SHuffle ^® T7 E. coli / K12, следуя протоколу лаборатории Pioszak ¹⁰. Ночную заквасочную культуру использовали для инокуляции 2 × 1 л среды Luria Broth (LB) в 2-литровых колбах Эрленмейера с перегородками и выращивали до OD ₆₀₀ 0,7 при встряхивании при 200 об / мин. Колбы переносили в шейкер при 16 ° C и экспрессию индуцировали в течение 16 часов с помощью 0,4 мМ изопропил-β-D-1-тиогалактопиранозида (IPTG). Если не указано иное, все последующие стадии проводили при 4 ° C.Клетки собирали центрифугированием при 4000 × g в течение 10 минут и осадок ресуспендировали в 10 мл буфера для ресуспендирования (50 мМ Трис-HCl pH 7,5, содержащий 150 мМ NaCl и 10% глицерин, коктейль ингибиторов протеазы; Roche) на 1 л культуры. . Клетки лизировали в гомогенизаторе Avestin EmulsiFlex C5 и лизаты осветляли центрифугированием при 48000 g в течение 30 мин. Супернатант переносили в коническую пробирку на 50 мл, содержащую 2 мл 50% суспензии Ni ²⁺ -агарозы, предварительно уравновешенной буфером для ресуспендирования, и абсорбция MBP-R-спондина 1 на Ni ²⁺ -агарозе была проводится в течение 1 ч при осторожном перемешивании.Лизат и гранулы Ni ²⁺ -агарозы переносили в 14-сантиметровую колонку Econo-Pac (Bio-Rad), трижды промывали 10 мл буфера для ресуспендирования, содержащего 25 мМ имидазол, и MBP-R-спондин 1 элюировали в 1 мл. фракции буфера для ресуспендирования, содержащие 265 мМ имидазол.

Элюированные фракции, содержащие MBP-R-спондин 1, объединяли и концентрировали с использованием центрифужного фильтра Amicon Ultra-15 (Millipore). Замену буфера на дисульфидный буфер для перетасовки (50 мМ трис-основания, pH 8,0, содержащего 150 мМ NaCl, 5% глицерин, 1 мМ ЭДТА, 5 мМ восстановленный глутатион и 1 мМ окисленный глутатион) проводили с использованием обессоливающей колонки PD10 Sephadex G25 (GE Healthcare ).Концентрацию объединенных фракций разбавляли до 1 мг / мл буфером для перетасовки дисульфида и инкубировали в течение 12 часов при комнатной температуре. Перетасованный белок вводили в колонку HiLoad Superdex 200 пг 16/600 (GE Healthcare), уравновешенную буфером для ресуспендирования, и разделенные фракции, содержащие MBP-R-спондин 1 (идентифицированный SDS-PAGE), объединяли и концентрировали с использованием Amicon Ultra-14. центрифужный фильтр. Замена буфера осуществлялась с использованием обессоливающей колонки PD10 Sephadex G25 (GE Healthcare), уравновешенной буфером IEX (50 мМ Na ²⁺ / K ⁺ фосфатный буфер, pH 7.0, содержащий 5% глицерина). На этом этапе слитый белок MBP-R-спондин 1 может быть проанализирован для определения концентрации (с использованием анализа белка Брэдфорда; Bio-Rad) и использован в среде для роста органоидов в концентрации 25 нМ (см. Результаты).

MBP-R-спондин 1 инкубировали с 5 ед. Тромбина (Sigma) на мг белка в течение 8 часов при комнатной температуре, и расщепленный фрагмент R-спондина 1 разделяли с помощью катионообменной хроматографии (IEX) с HiTrap SP HP 5. мл колонки на очистителе AKTA, уравновешенном буфером IEX (15 мМ натрий-фосфатный буфер, содержащий 5% глицерина) с линейным градиентом до 1 M NaCl в буфере IEX.Фракции, содержащие R-спондин 1 (идентифицированные с помощью SDS-PAGE), объединяли, концентрировали и заменяли буфером, используя колонку PD10 Sephadex, уравновешенную фосфатно-солевым буфером (PBS). Клеточную активность очищенного R-спондина 1 определяли с помощью репортерного анализа пути Wnt (см. Ниже).

Экспрессия и очистка Gremlin 1

Человеческий Gremlin 1 экспрессировался из вектора His-tag на основе Т7, His-ΔN-Gremlin 1 (кодирует аминокислоты 72–184 Gremlin 1), в E. coli штамм BL21 (DE3) следующим образом: клетки из глицеринового исходного материала высевали на чашки с L-агаром со 100 мкг / мл ампициллина и выращивали в течение ночи.Клетки из планшетов выращивали в 2-литровых колбах с перегородками в 1 л 2xYT-среды до тех пор, пока OD ₆₀₀ не составляла 0,8, в этот момент экспрессия Gremlin 1 была индуцирована с помощью 400 мкг / мл IPTG в течение трех часов при 37 ° C. Клетки собирали центрифугированием в течение 20 минут при 4000 × g и хранили замороженными при -20 ° C. Замороженный осадок из 1 л культуры, экспрессирующей Gremlin 1, ресуспендировали в буфере для лизиса (50 мМ трис-основания, pH 8,0, 2 мМ EDTA, pH 8,0, 10 мМ DTT, 0,5% Triton-X100) и лизировали с использованием гомогенизатора Emulsiflex C5.Лизат инкубировали в течение 20 минут при 25 ° C с ДНКазой I (Sigma) и 4 мМ хлорида магния и осветляли центрифугированием в течение 30 минут при 15000 × g. Супернатант отбрасывали, а фракцию осадка, содержащую нерастворимые тельца включения, промывали ресуспендированием в буфере для лизиса с последующим центрифугированием в течение 30 минут при 15000 × g. Осадок повторно промывали буфером для лизиса, содержащим 1 М NaCl, и, наконец, буфером для лизиса без Triton-X100. Осадок ресуспендировали в 5 мл 100 мМ трис (2-карбоксиэтил) фосфина (TCEP), к которому добавляли 15 мл 50 мМ трис-HCl, pH 8.Добавляли 0,5 мМ EDTA, содержащую 8 M гидрохлорид гуанидина (GndHCl) (в результате конечная концентрация составляла 6 M GndHCl и 25 мМ TCEP). Ресуспендированный осадок инкубировали в течение 15 минут при 25 ° C, осветляли центрифугированием (20 мин, 15000 × g) и супернатант разбавляли до 100 мл 6 М мочевиной, 20 мМ HCl. Раствор солюбилизированного белка затем быстро смешивали с 900 мл буфера для рефолдинга (50 мМ Трис, pH 8,0, 1 М 3- [3- (1,1-бисалкилоксиэтил) пиридин-1-ил] пропан-1-сульфонат (PPS), 50 мМ этилендиамин, 2 мМ ЭДТА, 2 мМ цистеин и 0.2 мМ цистина) и оставили на 7 дней при 4 ° C, чтобы обеспечить правильное образование дисульфидных связей.

После центрифугирования (15000 × g в течение 30 минут) pH раствора повторно свернутого белка доводили до 7,0 и наносили на 5 мл колонку HiTrap SP HP, уравновешенную связывающим буфером (20 мМ Hepes, pH 7,0). Gremlin 1 элюировали с использованием линейного градиента 75 мл от 0% до 100% буфера для элюирования (20 мМ Hepes, pH 7,0, 1 М NaCl), и фракции пиков, проанализированные с помощью SDS-PAGE, объединяли. На этой стадии очистки Gremlin 1 можно использовать в эпителиальных органоидных средах тонкого кишечника в концентрации 25 нМ.

Дальнейшая очистка Gremlin 1 осуществляется добавлением ацетонитрила и трифторуксусной кислоты до концентрации 10% и 0,1% соответственно. Образец загружали на колонку с обращенной фазой ACE 5 C8-300 (4,6 × 250 мм) (HiChrom), уравновешенную связывающим буфером (10% ACN, 0,1% TFA). Белки элюировали линейным градиентом 20 мл от 20% до 40% ACN, содержащего 0,1% TFA. Пиковые фракции с чистым белком (проанализированные с помощью SDS-PAGE) были объединены, и их концентрация была определена с использованием поглощения при 280 нм с расчетным молярным коэффициентом поглощения 11 460 моль ^-1 · см ^-1.Аликвоты 500 мкг чистого Gremlin 1 сушили под вакуумом в центробежном концентраторе и хранили при -80 ° C. При таком хранении протеин стабилен не менее 24 месяцев. Перед использованием очищенный гремлин 1 восстанавливали в PBS в концентрации 1 мг / мл и определяли клеточную активность с помощью анализа щелочной фосфатазы (см. Ниже).

Анализ клеточного репортера активности R-спондина 1

Клеточные активности фракций MBP-R-спондина и R-спондина 1 определяли по их способности усиливать активность Wnt3A-индуцированного пути в клетках HEK293T, обозначенную как WPC50 (путь Wnt константа потенцирования активности) и определяется как концентрация добавленных R-спондинов, достаточная для 50% общей репортерной активности.Клетки высевали на 24-луночные планшеты для тканевых культур (75000 клеток на лунку) в среде DMEM с добавлением 10% фетальной телячьей сыворотки (Gibco) и трансфицировали 100 нг SuperTop и 10 нг pRL-SV40P плазмидами. Трансфицированные клетки обрабатывали средой, кондиционированной Wnt3A (WCM; полученной из L-клеток, экспрессирующих Wnt3A; ATCC CRL-2646), разбавленной 1: 4 средой для выращивания и различными концентрациями R-спондина 1 (обычно 1–150 нМ). Через 16 часов после обработки клетки собирали и репортерную активность определяли с помощью набора Promega Stop & Glo с использованием считывающего устройства для микропланшетов PHERAstar.Нормализованную активность люциферазы определяли делением значений люциферазы светлячка на значения люциферазы Renilla . Значения активности SuperTop для каждой концентрации R-спондина были средними для четырех индивидуальных биологических повторов и представлены со стандартным отклонением (SD). Все значения WPC50 были рассчитаны с использованием программного обеспечения GraphPad Prism Software Version 5 путем подгонки уравнения Хилла к данным доза-реакция.

Клеточная активность гремлина 1

Клеточная активность очищенного гремлина 1 определяется как IC ₅₀ для ингибирования BMP2-индуцированной клеточной активности с использованием анализа щелочной фосфатазы (анализ ALP) ¹².Оптимальную концентрацию BMP2 для использования в анализах активности Gremlin 1 определяли следующим образом: клетки C2C12 (критично малое число пассажей) помещали в 96-луночные планшеты и культивировали в среде DMEM, содержащей 10% FBS. К клеткам добавляли серийное разведение BMP2 (0–15 нМ) и инкубировали в течение 48 часов. Клетки промывали PBS и лизировали 0,56 мМ 2-амино-2-метилпропан-1-олом и 1,0% SDS, pH 10,0. Активность ALP измеряли с использованием субстрата p -нитрофенилфосфат (гранулы Sigmafast pNPP; Sigma Aldrich) и считывали оптическую плотность при 405 нм с использованием планшет-ридера PHERAstar FS.Величина EC ₅₀ для BMP2-индуцированной активности ALP была определена как 5,8 ± 0,28 нМ с насыщающей активностью приблизительно при 12 нМ. Значения активности для каждой концентрации BMP2 были средними для 3 отдельных экспериментальных повторов, сообщенных с помощью SD. Субмаксимальное значение 8 нМ BMP2 было выбрано для использования в анализах активности Gremlin 1.

Определение Gremlin 1 IC ₅₀ для ингибирования BMP2-индуцированной активности ALP выполняли, как указано выше, с использованием серийных разведений Gremlin 1 (1-25 нМ) в присутствии 8 нМ BMP2.Значения активности для каждой концентрации Gremlin 1 были средними для 4 отдельных экспериментальных повторов, сообщенных с помощью SD. Все кинетические параметры для анализов ЩФ рассчитывали с использованием программного обеспечения GraphPad Prism Software Version 5 путем подгонки уравнения Хилла к данным доза-реакция.

Анализ эндотоксина

Уровни эндотоксина в препаратах R-спондина 1 и Gremlin 1 определяли с использованием системы ToxinSensor (GenScript) в соответствии с протоколом производителя. Значения были определены по меньшей мере из двух отдельных препаратов фракций R-спондина 1 и Гремлина 1, измерены с двумя техническими повторностями и представлены как средние значения с SD.Мы установили максимальную концентрацию эндотоксина 0,5 EU / мл в органоидной среде ниже порога минимального наблюдаемого клеточного эффекта (LOCE) для детектируемого клеточного производства цитокинов и активации NF-kB, ранее определенного в анализах клеточных культур ¹³.

Получение органоидных культур

Органоиды эпителия тонкого кишечника мышей и органоиды эпителия толстой кишки (мыши и человека) были получены в соответствии с Sato et al . ¹⁴ и Сато и др. .¹⁵ соответственно. Органоиды молочных желез мышей были получены, как описано в Nguyen-Ngoc et al . ¹⁶. Сводка всех составов сред, использованных в исследовании, представлена в таблице 2. Все производные культуры органоидов выращивали в 48-луночных планшетах CellStar (Sigma-Aldrich), залитых в каплю 25 мкл Matrigel (Corning), культивированных в 200 мкл. соответствующих органоидных сред в инкубаторе при 37 ° C и 5% CO ₂.

Все ткани мышей, использованные в исследовании, были собраны у умерщвленных мышей квалифицированными специалистами в учреждении Wellcome Trust Gurdon Institute в соответствии с руководящими принципами, утвержденными Министерством внутренних дел Великобритании.Органоиды, полученные из эпителия толстой кишки и рака толстой кишки человека, были взяты из биобанка тканей больницы Адденбрука и переданы в дар с информированного, явного согласия пациента. Человеческая ткань, полученная для исследования, находилась под общим этическим одобрением Биобанка, и были соблюдены все применимые институциональные руководящие принципы и правила, касающиеся использования человеческой ткани.

Оптимизация концентрации R-спондина 1 и Гремлина 1 в составах сред

Оптимизация концентраций R-спондина 1 и Гремлина 1 для использования в средах для культивирования эпителиальных органоидов тонкого кишечника мышей определяли путем выращивания органоидов в отдельных лунках с различными концентрациями R-спондина 1 (0–100 нМ) или гремлина 1 (0–25 нМ) в питательной среде с полностью дополненными органоидами.Характеристики роста (множественность и количество крипт) органоидов тестировали через 8 дней после посева. Множественность органоидов определяли как среднее количество органоидов для каждой обработки из 8 различных лунок, сообщенное с помощью SD. Число органоидных крипт определяли как среднее количество крипт из 10 органоидов в отдельных лунках, усредненное по 8 лункам, по данным SD. Статистические различия в множественности органоидов и количестве крипт между отдельными концентрациями и условиями среды для выращивания определяли с помощью двустороннего T-теста, рассчитанного с использованием программного обеспечения Excel.

Флуоресцентное обнаружение молекулярных маркеров в органоидах

Органоиды высевали и культивировали на восьмикамерных μ-слайдах (Thistle Scientific) в течение трех дней и фиксировали в 4% растворе формальдегида, и молекулярные маркеры визуализировали в соответствии с протоколом от Fatehullah ¹⁷ . Молекулярные зонды, используемые для флуоресцентного обнаружения и непрямой иммунофлуоресценции в органоидах, были следующими: конъюгированный с родамином агглютинин Ulex europeaus 1 (UEA; Vector Laboratories), фаллоидин Alexa Fluor 647 (Thermo Fisher Scientific) и антитела против β-катенина (BD Transduction Laboratories). ) или Ki67 (Thermo Fisher Scientific).Вторичные антитела представляли собой козий анти-мышиный IgG Alexa Fluor 555 и козий анти-кроличий IgG Alexa Fluor 488 (оба от BD Transduction Laboratories) соответственно.